Seong Ho Kang  Sangmin Jang  Ho-Keun Yi

Vol. 49,  No. 6, pp. 537-0, Dec.  2005
10.5012/jkcs.2005.49.6.537

인간비만유전자 중합효소연쇄반응 점돌연변이 단일가닥구조다형성/모세관전기영동법 Human Obesity DNA Polymerase chain reaction Single Strand Conformation Polymorphism/Capillary Electrophoresis Point mutation

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단일가닥구조다형성(single strand conformation polymorphism, SSCP)과 모세관전기영동법(capillary electrophoresis, CE)을 응용하여 인간의 비만관련 유전자를 빠르고 간단히 검출할 수 있는 SSCP-CE 방법을 개발하였다. 소아비만의 관련변이로 예측되고 있는 Leu72Met 변이유전자를 중합효소연쇄반응을 통해 증폭을 하였다. 증폭된 207-bp 비만유전자의 이중나선-유전자 (ds-DNA)를 95 ^oC에서 단일가닥-유전자(ss-DNA)로 변성시킨 뒤, 1 ^oC의 얼음중탕에서 단일가닥-유전자가 초기의 이중나선-유전자와 다른 구조의 조각들을 생성하였다. 생성된 다른 형태의 유전자 절편들은 5%(w/w) 글리세롤, 1.5%(w/v) PVP(_r 1 300 000)와 1.0%(w/v) PEO _r 600 000)의 혼합 충진젤이 포함된 용융-실리카 모세관(50 μm I.D. ×365 mm O.D. ×60 cm total length; 30 cm effective length)에서 전기영동적으로 분리를 하였다. 375 V/cm의 전기장으로 인간의 비만유전자를 9분 안에 분석을 할 수 있었다. 본 SSCP-CE법은 기존의 전통적인 슬랩젤전기영동법보다 최소 10배 이상의 빠른 분석시간을 보여주었다. We have investigated a capillary electrophoresis (CE) method using single strand conformation polymorphism (SSCP) for the rapid detection of human obesity DNA. Using polymerase chain reaction (PCR) we amplified human obesity DNA, Leu72Met mutation made an estimate of child obesity DNA mutant. The ss-DNA fragments, which are different to original DNA fragments, were prepared by directly immersing in 1 ^oC ice bath after denaturing the amplified 207-bp human obesity ds-DNA sample at 95 ^oC. The prepared ss-DNA fragments were separated in a fused-silica capillary (50 mm I.D. ×365 mm O.D. ×60 cm total length; 30 cm effective length) filled with 1.5% poly (vinylpyrrolidone) (_r 1 300 000), 1.0% poly(ethyleneoxide) (_r 600 000) and 5%(w/w) glycerol as the sieving matrix and running buffer, based on gel electrophoretic separation. Under the electric field of 375 V/cm, the human obesity DNA was analyzed within 9 min at the CE. The SSCP-CE showed at least the 10-times faster analysis time than the traditional slab gel electrophoresis.